postopek ekstrakcije silimarina
Silimarin, mešanico flavonolignanov, ki kažejo številne farmakološke aktivnosti, dobimo iz plodov oslička (Silybum marianum L. Gaertner). Evropska farmakopeja zaradi visoke vsebnosti lipidov v plodovih badelj priporoča dvostopenjski postopek njegove ekstrakcije. Najprej plodove razmastimo 6 ur z uporabo n-heksana; drugič, silimarin ekstrahiramo z metanolom še 5 ur.
Predstavljeni podatki kažejo, da je mogoče ta izjemno dolg tradicionalni postopek ekstrakcije Soxhlet skrajšati na nekaj minut z uporabo ekstrakcije tekočine pod pritiskom (PLE). PLE omogoča tudi odpravo faze razmaščevanja, ki jo zahteva tradicionalni postopek, s čimer se poenostavi postopek ekstrakcije silimarina in prepreči izguba silimarina, ki nastane zaradi razmastitve. Izkoristki PLE, pridobljeni v optimiziranih pogojih ekstrakcije, so očitno boljši od izkoristkov, pridobljenih s farmakopejsko priporočeno ekstrakcijo Soxhlet.
Dobitek PLE silichristina, silydianin, silybin A, silybin B, izosilybin A in izosilybin B v acetonu je 3,3, 6,9, 3,3, 5,1, 2,6 in 1,5 mg / g nemastnih plodov. Peturna Soxhletova ekstrakcija z metanolom na razmaščenem sadju daje le ~ 72% količine silimarina, pridobljene v 10 minutah PLE pri 125 ° C.
Kaj je Silybum?
Silybum marianum L. Gaertner, splošno imenovanmlečni osat, osveščeni mleček, osat, Mary thistle ali Saint Mary' s Thistle, je enoletna ali dvoletna rastlina iz družine Asteraceae. Rastlino, ki je prvotno rasla v južni Evropi in Aziji, danes najdemo po vsem svetu (1). Ta težaven plevel se danes goji kot zdravilna rastlina in je ena najpomembnejših zdravilnih rastlin v Evropi.
Mlečni badelj se v medicinske namene uporablja že več kot 2000 let, najpogosteje za zdravljenje bolezni jeter (ciroza in hepatitis), pa tudi za zaščito jeter pred strupenimi snovmi (2–5). Nedavno raziskovalno zanimanje za to rastlino so spodbudile študije, ki kažejo na njeno izjemno visoko protitumorsko aktivnost. Izvlečke iz rastline zdaj intenzivno preučujejo v eksperimentalni kemoprevenciji raka in izboljšanju neželenih učinkov kemoterapije (6). Nedavna poročila so pokazala, da so za izvlečke iz te rastline značilne tudi številne druge farmakološke dejavnosti, kot so protivnetni in antifibrotični učinki (2, 7, 8).
Silimarin, mešanica flavonolignanov, ki kaže številne farmakološke aktivnosti, se pridobiva iz semen mlečnega badlja (Silybum marianum L. Gaertner). Doslej običajni postopki za ekstrakcijo silimarina temeljijo predvsem na počasnih visokotemperaturnih metodah ekstrakcije s topilom. Pomanjkljivosti, povezane s temi tehnikami, so privedle do iskanja novih nadomestnih postopkov ekstrakcije, ki bi se lahko dodatno izboljšaliizvlečki silimarinakakovost. Slednje je še posebej pomembno pri uporabi silimarina. Pridobljeni izvlečki silimarina bi dejansko lahko vsebovali strupene organske ostanke, ki jih je treba odstraniti, da bi bili potrošniki sprejemljivi.
V poskusu izboljšati postopek ekstrakcije silimarina in ga narediti učinkovitejšega in okolju bolj prijaznega, nedavno ekstrakcija topil s pomočjo mikrovalov, ekstrakcija topil s pomočjo ultrazvoka, ekstrakcija tekočin pod pritiskom, ekstrakcija s pomočjo encimov, ekstrakcija nadkritične tekočine in zlasti ekstrakcija vode podkritično Razvite in uporabljene so tudi metode ekstrakcije tople vode pod pritiskom.
Materiali in metode
Rastlinski material
Posušeni plodovi S. marianum L. Gaertner so bili kupljeni v lokalni lekarni (Lublin, Poljska) jeseni 2011. Dovolj velik reprezentativen vzorec rastlinskega materiala (približno 500 g) smo zmleli in presejali, da smo dobili velikost delcev 0,4 mm Za ekstrakcije smo uporabili natančno stehtane dele materiala.
Materiali in reagenti
Standardizirani suhi ekstrakt S. marianum L. Gaertner in silibin B (s čistočo 98%), ki se uporabljata kot standard, je bil kupljen pri Sigma-Aldrich na Poljskem. Aceton, etil acetat, fosforjeva kislina, n-heksan (vsi z analitskim reagentom) in metanol (z analitskim reagentom in HPLC) so bili kupljeni pri poljski kemijski tovarni (POCh, Gliwice, Poljska). Vodo smo prečistili z uporabo sistema Milli-Q podjetja Millipore (Millipore, Bedford, MA, ZDA). Nevtralno steklo, pridobljeno kot darilo iz lokalne steklarne (frakcija 0,4–0,6 mm), smo uporabili kot disperzno sredstvo v celici PLE.
Ekstrakcija tekočine pod pritiskom
PLE je bil izveden z instrumentom Dionex ASE200 (Dionex Corp., Sunnyvale, CA, ZDA). Rastlinski material (0,5 g) zmešamo z inertnim materialom (nevtralno steklo) in ga položimo v 22-mililitrsko ekstrakcijsko celico iz nerjavečega jekla, ki na dnu vsebuje filtrirni papir. Na vrh ekstrakcijske celice je bil postavljen še en krog filtrirnega papirja. Na koncu je bila celica tesno zaprta in postavljena v ogrevalno peč.
Vsebino celice smo ekstrahirali pri delovnem tlaku 60 barov. Na koncu postopka smo ekstrahirani vzorec izprali z uporabo volumna topila, enakega 60% prostornine ekstrakcijske celice. Nazadnje smo vzorec 60 sekund izpirali z dušikom pod pritiskom (150 psi) in ekstrakt zbrali v 60-mililitrsko stekleno vialo s teflonsko prevlečeno gumijasto kapico. Prostornina zbranega ekstrakta je bila med 25 in 31 ml, odvisno od gostote pakiranja ekstrakcijske celice. Dobljeni ekstrakt smo prenesli v 50-mililitrsko merilno bučko in napolnili do volumna z uporabo ustreznega tipa topila. V enakih pogojih smo izvedli tri neodvisne ekstrakcije. Med postopki je bil sistem opran z ustreznim ekstrakcijskim topilom.
Preučevani parametri PLE so bili topilo (metanol, aceton in etil acetat), temperatura (50, 75, 100, 125 in 150 ° C), čas (5, 10, 15 in 20 minut) in število ekstrakcijskih ciklov (1 –5). Za postopek razmaščevanja PLE smo kot topilo uporabili n-heksan, preučevana parametra pa sta bila temperatura (50 in 100 ° C) in čas (5 in 10 minut) odstranjevanja lipidov. Ekstrakte acetona in etil acetata uparimo do suhega v vakuumu in ponovno raztopimo v metanolu pred kromatografsko analizo.
Soxhletova ekstrakcija
Izčrpne ekstrakcije v aparatu Soxhlet so bile izvedene z uporabo 2,0 g delov materiala. Natančno stehtane vzorce smo prenesli na papirnati naprstnik. Naloženi naprstnik smo vstavili v 100-mililitrski ekstraktor Soxhlet. Ekstrakcije so bile izvedene v dvostopenjskem postopku (n=3). V prvem koraku postopka smo rastlinski material razmaščevali 6 ur z uporabo 75 ml n-heksana. V drugem smo silimarin 5 ur ekstrahirali s 75 ml metanola. Po ohladitvi na sobno temperaturo dobljeni ekstrakt prenesemo v 100-mililitrsko merilno bučko, ki jo nato do svoje prostornine napolnimo z metanolom. Opravljene so bile tri neodvisne ekstrakcije.
Kromatografska analiza ekstraktov
Meritve HPLC so bile opravljene na tekočem kromatografu Dionex (Dionex Corp.), ki je sestavljen iz ohišja za kromatografijo (LC20), ki vsebuje PEEK avtomatski vbrizgalni ventil, opremljen z vzorčno zanko 10 μL, gradientno črpalko (GP50), detektorjem absorpcije (AD25) in detektor fotodiodnih nizov (PDA100). Celoten kromatografski sistem je bil pod nadzorom sistema za zajem podatkov PeakNet6. Kromatografsko ločevanje smo izvedli pri 40 ° C z uporabo kolone Prodigy ODS-2 (5 μm, 250 × 4,6 mm, ID) (Phenomenex, Torrance, CA, ZDA). Mobilna faza A je bila zmes metanola z vodno raztopino fosforne kisline, ki je vsebovala 0,5 ml 75% fosforne kisline v 100 ml raztopine (35: 65, v / v). Mobilna faza B je bila zmes metanola z vodno raztopino fosforne kisline, ki je vsebovala 0,5 ml 75% fosforne kisline v 100 ml raztopine (50: 50, v / v). Hitrost pretoka je bila 0,8 ml / min. Analize so bile izvedene v mobilnem faznem gradientu z odstotkom B v A, ki se spreminja, kot sledi: začetna koncentracija, 0% B; 28 min, 100% B; 35 min, 100% B, 36 min 0% B. Pred naslednjo analizo smo kolono uravnotežili z uporabo mobilne faze, ki je vsebovala 0% B, 20 minut. Vsak ekstrakt smo trikrat analizirali s HPLC. Valovna dolžina za odkrivanje flavonolignanov je bila nastavljena na 288 nm, za karakterizacijo vrha pa so bili zabeleženi tudi UV-Vis spektri od 210 do 500 nm.
Kvalitativna analiza ekstraktov je bila izvedena s primerjavo retencijskih časov vrhov in njihovih UV-Vis spektrov v ekstraktih glede na standardne vzorce suhega silimarina. Za pripravo standardizirane suhe raztopine silimarina smo 0,02 g vzorca, ki vsebuje 5,0 mg silinina A + B, raztopili v 50 ml metanola. Vrhovi za silichristin, silydianin, silybin A, silybin B, izosilybin A in B so se pojavili v retencijskih časih 15,1, 17,4, 27,5, 29,1, 33,6 in 34,8 min. Kvantitativna analiza je temeljila na standardu silibin B in uporabljena je bila zunanja standardna metoda. Kalibracijska krivulja je bila ustvarjena iz petih koncentracij spojine v območju koncentracij 0,1–1,0 mg / ml. Opravljene so bile tri meritve površine vrha za vsako koncentracijo standardne raztopine. Karakteristični parametri dobljene umeritvene krivulje so bili naslednji: naklon 0,516 in presek 0,003. Ugotovljeno je bilo, da je umeritvena krivulja v preskušenem območju koncentracij linearna. Ugotovljeno je bilo, da je korelacijski koeficient> 0,995. Zaradi težav z nakupom standardov silichristin, silydianin, silybinin A, izosilybin A in B so bile količine teh spojin izračunane tako, da so se njihovi kromatografski odzivi povezali s kalibracijsko krivuljo za silybin B.
Statistična analiza
Vsi podatki so izraženi kot povprečje ± standardni odklon (SD). Analiza variance (ANOVA) in F-test sta bila uporabljena za oceno vpliva pogojev PLE na donos silimarina. Povprečne vrednosti so bile bistveno drugačne, če so se rezultati primerjanih parametrov razlikovali pri P=0,05 stopnje pomembnosti. Za preverjanje pomembnosti vsakega Fisherjevega koeficienta so bile uporabljene vrednosti P.
Rezultati
Na sliki 1a je tipičen kromatogram ekstrakta PLE, pridobljenega iz plodov S. marianum L. Gaertner, medtem ko je na sliki 1b prikazan kromatogram ekstrakcije silimarina iz raztopine badelj, pripravljenega za raztapljanje standardiziranega suhega ekstrakta S. marianum L. Gaertner v metanolu (1 mg / ml). Analiza kromatogramov izvlečkov PLE ali Soxhlet z izvlečkom za standardizirano raztopino (retencijski časi, UV-Vis spektri in indeks največje čistosti) je pokazala, da uporabljeni kromatografski pogoji omogočajo zadostno ločljivost preiskovanih spojin, vrhovi oštevilčeni od 1 do 6 iz komponent matrike vzorca. Vrhove smo identificirali kot: (1) silikristin, (2) silidijanin, (3) silibin A, (4) silibin B, (5) izosilibin A in (6) izosilibin B.
Kako izvleči osat?
Za razliko od večine zelišč semena badelj v vodi ne izvlečejo dobro, zato ne poskušajte iz njih pripraviti skodelice čaja! Namesto tega pojejte sveža mleta semena ali dobite kakovostno kapsulo. Če uporabljate semena, jih kupite cele in jih nato po potrebi zmeljete (za kavni mlinček jih naredim v grob prah). Semena so naenkrat mastnega, sladkega in grenkega okusa - morda so že pridobljen okus, vendar sploh niso neprijetna. Začnite z jemanjem 1/2 do 1 žlice na dan, ki jo potresete po hrani, in si oglejte, kako se vam zdi, ter prilagodite količino, kot jo potrebujete.
Sestavine
1 skodelica mlačne vode
1 skodelica 100-odstotnega alkohola Uporabljam vodko
¾ do 1 skodelice semen mleka badlja, če je mogoče, zmlete
Navodila
Sterilizirajte uporabljeni kozarec Mason, tako da ga za približno 10 minut postavite v vrelo vodo ali ga postavite na stojalo v pečici pri približno 250 stopinjah za 15 minut.
Vse sestavine nalijte v masonov kozarec.
Na kozarec položite nov pokrov in ga s prstanom trdno privijte.
Kozarec močno stresite približno 1 minuto.
Kozarec postavite za pet tednov v hladen temen prostor.
Vsak dan pretresite kozarec, da zagotovite, da semena mleka ne priplavajo do vrha in se popolnoma napolnijo z alkoholom in vodo.
Po koncu določenega števila tednov skozi osupljivo cedilo odcedite mleko iz tekočine skozi tekoče cedilo, pri čemer zadržite tekočino. Če nimate cedila s fino mrežico, uporabite majhen cedilo in / ali cedilo podložite z več filtri za kavo, da zmanjšate velikost odprtin.
Kako dolgo začne osat začeti veljati?
Seme mleka lahko osvobodi jetrne celice pred strupenimi kemikalijami in zdravili. Zdi se, da ima tudi krvni sladkor, antioksidativne in protivnetne učinke.
Izboljšanje parametrov oksidativnega stresa je bilo stalno opaženo pri šestih mesecih' trajanje zdravljenja s specializiranim sistemom za dovajanje mleka (2). Izboljšanje vzorcev oksidativnega stresa je odgovorno za izboljšano signalizacijo insulina in delovanje jetrnih celic.
Kako dolgo je treba jemati osat? (Mlečni osat DOSAGE)
Mlečni badelj velja za varnega v odmerkih 420 mg / dan peroralno v razdeljenih odmerkih do 41 mesecev. En vir predlaga dnevne odmerke od 12 do 15 g suhega sadja za dispepsijo in motnje žolčnega sistema, medtem ko se ekstrakt, ki vsebuje 200 do 400 mg silimarina na dan, šteje za učinkovitega pri različnih jetrnih boleznih.
Prednosti mlečnega badlja
1. podpira zdravje jeter
Eden najpogostejših načinov uporabe badlja je zdravljenje težav z jetri. Študija iz leta 2016 je pokazala, da badelj izboljša mišično poškodbo jeter zaradi prehrane. Potrebno je več dokazov, da dokažejo, da čičerika na enak način koristi človeškim jetrim, vendar pa raziskovalci teorijo o njej. Aktivna sestavina mleka iz badelj, silimarin, deluje kot antioksidant z zmanjšanjem proizvodnje prostih radikalov. Znanstveniki menijo, da to ustvarja razstrupljevalni učinek, zato je mlečni badelj lahko koristen pri težavah z jetri.
Dokler ne bomo izvedli več raziskav, pa badelj ni priporočljiv kot primarna možnost zdravljenja težav z jetri. Vendar je morda koristno, če poskusite dopolnilno zdravljenje.
2. Spodbuja zdravje kože
Olje mleka se lahko lokalno uporablja za izboljšanje zdravja kože.
Mlečni osat lahko pomaga pri spodbujanju zdrave kože. Študija iz leta 2015 je pokazala, da badelj pomaga izboljšati vnetna stanja kože, kadar ga nanesemo na kožo miši.
V drugi študiji je bilo v laboratorijskem okolju ugotovljeno tudi, da ima mleko badelj antioksidativne in anti-age učinke na človeške kožne celice.
Potrebne so nadaljnje raziskave na ljudeh, da bi ugotovili, kakšne koristi lahko človek pričakuje od nanašanja mleka na svojo kožo.
3. Zmanjša holesterol
Visok holesterol lahko privede do težav s srčnim zdravjem in poveča možnost človekove kapi.
Študija iz leta 2006 kaže, da ima lahko badelj pomembno vlogo pri zniževanju ravni holesterola. Ugotovili so, da je bila raven holesterola pri ljudeh, ki jemljejo badelj za zdravljenje diabetesa, nižja kot pri tistih, ki so jemali placebo.
4. Podpira hujšanje
Začetne raziskave na živalih, opravljene leta 2016, so pokazale, da je silimarin povzročil izgubo teže pri miših, ki so se hranile z dieto, namenjeno povečanju telesne mase.
To nakazuje, da je lahko badelj koristen za tiste, ki želijo shujšati. Za potrditev tega je treba opraviti več raziskav o vplivu mleka z osatom na hujšanje pri ljudeh.
5. Zmanjša odpornost na inzulin
Študija na miših je pokazala, da je ekstrakt badelj pomagal zmanjšati odpornost na inzulin. Odpornost na inzulin je težava za ljudi s sladkorno boleznijo tipa 2.
Čeprav te raziskave kažejo, da bi lahko badelj igral vlogo pri obvladovanju diabetesa, je potrebnih več raziskav, da se potrdi, ali mlečni badelj zmanjša odpornost proti insulinu in podpira zdravljenje diabetesa.
6. Izboljša simptome alergijske astme
Aktivna sestavina mleka lahko pomaga zmanjšati vnetje. Študija iz leta 2012 je pokazala, da silimarin pomaga zaščititi pred vnetji v dihalnih poteh miši z alergijsko astmo.
Potrebnih je več raziskav, da bi ugotovili, ali silimarin koristi simptomom astme pri ljudeh.
7. Omejuje širjenje raka
Mlečni osat lahko pomaga ustaviti širjenje nekaterih vrst raka. Pregled iz leta 2016 je pokazal, da izvleček badlja zavira rast rakavih celic pri kolorektalnem raku.
Potrebnih je več raziskav, da bi ugotovili, kako se lahko badelj uporablja za boj proti raku.
8. podpira zdravje kosti
Čaj iz mleka lahko pomaga preprečiti izgubo kosti zaradi pomanjkanja estrogena. Mlečni badelj ima lahko pomembno vlogo pri podpiranju zdravja kosti. Študija iz leta 2013 je pokazala, da badelj pomaga preprečevati izgubo kosti. Študija je posebej proučevala izgubo kosti zaradi pomanjkanja estrogena. Zaenkrat še ni jasno, ali je badelj enako koristen pri izgubi kosti z drugačnim vzrokom. Potrebne so nadaljnje študije, preden lahko varno sklepamo, da mlečni badelj podpira zdravje kosti pri ljudeh.
9. Izboljša kognicijo
Študija iz leta 2015 je pokazala, da mlečni badelj poveča odpornost na oksidativni stres. Oksidativni stres je potencialni vzrok za Alzheimerjevo bolezen.
Na ta način lahko badelj pomaga izboljšati kognicijo in zdravljenje degenerativnih stanj, ki vplivajo na um. Potrebnih je več raziskav na ljudeh, da bi potrdili učinke badlja na kognicijo.
10. Krepi imunski sistem
Mlečni osat lahko pomaga pri krepitvi imunskega odziva osebe&# 39 in mu pomaga pri boju proti okužbam.
Študija iz leta 2016 na živalskem modelu je pokazala, da je izvleček badlja izboljšal imunost ob zaužitju. Starejša študija je pokazala, da ima izvleček badelj pozitiven učinek na imunski odziv pri ljudeh.
Potrebnih je več študij s človeškimi udeleženci, preden bodo znanstveniki lahko z gotovostjo trdili, da mlečni badelj krepi imunski sistem osebe.
Neželeni učinki mleka
Zdi se, da ima badelj malo neželenih učinkov, tudi če ga jemljete več let. Nekateri ljudje imajo slabost, drisko, srbenje in napihnjenost.
Za mleko v obliki prahu v razsutem stanju nas kontaktirajte naherbext@undersun.com.cn
Reference: https: //academic.oup.com/chromsci/article/53/2/366/307144
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128093801000152
https://www.cambridgenaturals.com/blog/milk-thistle-food-for-the-liver
https://www.survivalsullivan.com/milk-thistle-extract/
https://www.webmd.com/digestive-disorders/milk-thistle-benefits-and-side-effects
https://www.medicalnewstoday.com/articles/320362#how-to-use-milk-thistle
